ADN Recombinante natural y artificial en la infección por Clostridium botulinum

ADN Recombinante artificial

TEMA: Vacuna recombinante holotoxoide contra el botulismo

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OBJETIVOS: Desarrollar nuevas estrategias de vacunación
GEN A CLONAR: Gen boNT A

ENZIMA DE RESTRICCION: Las enzimas de restricción fueron de New England Biolabs (No especifica)
ENZIMA LIGASA: No especifica
VECTOR: pCITE4a
CELULA RECEPTORA: Neurona
METODO DE INSERCION DEL GEN: Regiones LC y HC del gen de la neurotoxina
METODO DE IDENTIFICACION DE CLONES: PCR tilizando ADN cromosómico de C. botulinum

ADN Recombinante natural

La bacteria Clostridium botulinum contiene pequeñas moléculas de ADN necesarias para producir la toxina botulínica y para llevar a cabo la segregación de estos ADN tóxicos, las bacterias pliegan el ADN en forma de anillo, para la formación de este doble anillo, la proteína TubR se asocia a una región del ADN para formar el segrosoma, luego, el ADN se dobla dando lugar a las estructuras circulares dobles. Por último, la proteína motora TubZ se uniría al segrosoma para trasladar el material genético hasta diferentes puntos de la célula.

Bibliografía

https://journals.asm.org/doi/full/10.1128/IAI.00843-07

https://www.cnb.csic.es/index.php/es/cultura-cientifica/noticias/item/1507-un-doble-anillo-para-segregar-el-adn-responsable-de-la-produccion-de-la-toxina-botulinica

Secuenciación en el síndrome nefrótico córticorresistente 

La secuenciación masiva es una estrategia eficiente para el diagnóstico genético del SNCR. Dicha secuenciación permite el análisis en paralelo de múltiples genes o regiones seleccionadas del ADN que se relacionan con fenotipos parecidos o solapantes, puesto que las mutaciones en múltiples genes glomerulares pueden incrementar la severidad de la enfermedad. Se realizo una investigación y los resultaros arrojaron que hay mutaciones en los genes NPHS1, NPH2S, WT1, TRPC6 e INF2.

Bibliografía

https://scielo.isciii.es/pdf/nefrologia/v34s1/03_resumenes2.pdf 

Reacción en Cadena de la Polimerasa en la nefrosis

Tema: Identificación de variantes del gen NPHS2 en niños con síndrome nefrótico corticorresistente

Objetivo: Identificar mutaciones de NPHS2 en niños con SNCR, y establecer la prevalencia de las variantes más frecuentes en un grupo de adultos sanos.

Tipo de muestra biológica: Se extrajo muestra de sangre periférica utilizando un método estándar (QIAamp DNA Mini and Blood Mini, Qiagen) según protocolo del fabricante.

Tipo de Ácido Nucleico a ser extraído: ADN genómico

Kit: Big-Dye Terminator Sequencing Kit

Gen o secuencia a amplificar: NPHS2 variantes p.R229Q y p.A284

Tipo de PCR: PCR utilizando partidores de acompañamiento intrónico y PCR utilizando las enzimas de restricción ClaI y HhaI para p.R229Q y p.A284

Visualización: Se visualizaron mediante electroforesis en gel de agarosa.

Bibliografía
1. Azocar Marta, Vega Álvaro, Farfán Mauricio, Cano Francisco. Identificación de variantes del gen NPHS2 en niños con síndrome nefrótico corticorresistente. Rev. chil. pediatr. [Internet]. 2016 Feb [citado 2021 Jul 9] ; 87( 1 ): 31-36. Disponible en: https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?pid=S0370-41062016000100006&script=sci_arttext

Alteraciones de la epigenética en la nefrosis  

Se han implicado más de 55 genes adicionales en formas monogénicas de SN, la caracterización funcional de estos genes ha esclarecido vías biológicas clave en la patogenia del Síndrome Nefrótico. Entre los primeros descubrimientos se encuentran genes implicados en el mantenimiento del diafragma de hendidura como lo son NPHS1 y NPHS2 que codifican la podocina y la regulación del citoesqueleto de actina ACTN4.

Bibliografía:

1.Watanabe A, Feltran L, Sampson M. National Kidney Foundation. [Online].; 2019 [cited 2021 Julio 3. Available from: https://www.ajkd.org/article/S0272-6386(19)30165-9/fulltext